發(fā)表時(shí)間:2024年12月
合作單位:農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)研究所
發(fā)表期刊:Journal of Hazardous Materials(IF 8.9)
塑料污染現(xiàn)狀嚴(yán)峻且向納米級轉(zhuǎn)化:塑料已成為現(xiàn)代生活不可或缺的材料,但大量塑料廢棄物造成了全球緊迫的環(huán)境問題,在水、海洋生物、人類排泄物甚至極地沉積物等多種介質(zhì)中均有檢出。環(huán)境風(fēng)化作用使塑料碎片逐漸分解為微塑料(<5μm)和納米塑料(<1μm),其中納米塑料(NPLs)因更豐富、反應(yīng)性更強(qiáng),能到達(dá)更偏遠(yuǎn)區(qū)域并穿透活細(xì)胞,環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)遠(yuǎn)高于微塑料。納米塑料與抗生素抗性基因(ARGs)的關(guān)聯(lián)研究不足:已有研究表明塑料可促進(jìn) ARGs 增殖,且納米材料(如金屬納米顆粒 AgNPs、ZnO NPs)與細(xì)菌抗生素抗性進(jìn)化相關(guān),但關(guān)于納米塑料對細(xì)菌抗生素抗性的影響尚不明確。金屬納米顆粒與納米塑料在物理化學(xué)性質(zhì)和界面活性上存在本質(zhì)差異,且雖有研究指出微塑料可吸附 ARGs 加速其傳播,但納米塑料與耐藥菌共存狀態(tài)及作用機(jī)制的研究仍較零散。
粘質(zhì)沙雷氏菌的研究價(jià)值:粘質(zhì)沙雷氏菌在自然環(huán)境中分布廣泛,可定殖于水和土壤介質(zhì),是醫(yī)院獲得性感染的重要條件致病菌,能引發(fā)肺炎、尿路感染和敗血癥等疾病,且其自身攜帶 ARGs。隨著廣譜抗生素的大量使用,該菌的耐藥性增強(qiáng),對臨床治療構(gòu)成挑戰(zhàn),因此研究納米塑料脅迫下其抗生素抗性軌跡具有重要意義。
轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq)+基因組測序
1、納米塑料可促進(jìn)粘質(zhì)沙雷氏菌抗生素抗性進(jìn)化,且作用受粒徑影響:
暴露于納米塑料后,粘質(zhì)沙雷氏菌對磺胺甲噁唑(SMX)、諾氟沙星(NOR)、鏈霉素(STR)、卡那霉素(KA)等抗生素的抑菌圈逐漸縮小,ARGs 相對豐度顯著高于無納米塑料組(CK),且呈現(xiàn) “200nm 納米塑料組(T2)>600nm 納米塑料組(T1)>CK” 的規(guī)律(T2、T1、CK 的 ARGs 相對豐度中位數(shù)分別為 0.82%、0.62%、0.56%)。
隨著傳代,CK 和 T1 組的 ARGs 豐度呈下降趨勢(歸因于基因適應(yīng)性成本),但 T1 組下降幅度小于 CK 組,而 T2 組 ARGs 豐度呈上升趨勢,表明小粒徑納米塑料對細(xì)菌抗生素抗性進(jìn)化的促進(jìn)作用更顯著。
2、不同粒徑納米塑料促進(jìn)抗性進(jìn)化的機(jī)制存在差異:
600nm 納米塑料:主要通過影響細(xì)菌細(xì)胞膜通透性促進(jìn)抗性。轉(zhuǎn)錄組分析顯示,其誘導(dǎo)的差異表達(dá)基因(DEGs)多與物質(zhì)運(yùn)輸和細(xì)胞膜功能相關(guān),如 LysE 家族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白通透酶等表達(dá)上調(diào),增強(qiáng)抗生素外排能力,進(jìn)而提升細(xì)菌抗性。
200nm 納米塑料:主要通過調(diào)控細(xì)菌代謝過程增強(qiáng)抗性。其誘導(dǎo)的 DEGs 多參與氧化還原過程、羧酸代謝過程等,如硫胺素焦磷酸結(jié)合蛋白(TPP)下調(diào)導(dǎo)致細(xì)菌代謝受損,激活抗性相關(guān)基因表達(dá);環(huán)氧奎奴基還原酶 QueH 上調(diào)提高細(xì)菌蛋白質(zhì)合成效率,促進(jìn)外排泵等抗性相關(guān)蛋白合成。同時(shí),200nm 納米塑料對細(xì)菌生長抑制更強(qiáng),使細(xì)菌進(jìn)入低代謝休眠狀態(tài),抵抗抗生素攻擊。
3、納米塑料通過誘導(dǎo)基因突變增強(qiáng)細(xì)菌抗性:
納米塑料暴露會導(dǎo)致粘質(zhì)沙雷氏菌發(fā)生單核苷酸多態(tài)性(SNP)突變,且粒徑越小突變概率越高(T2 組 SNP 純合子數(shù)量 31513 個(gè),T1 組 31380 個(gè))。突變基因功能主要涉及催化活性、結(jié)合、細(xì)胞膜、細(xì)胞過程和代謝過程,部分突變基因(如 HMI62_RS24365)可改變細(xì)胞膜功能,增強(qiáng)抗生素外排,進(jìn)而提升抗性。
4、納米塑料可加速 ARGs 水平轉(zhuǎn)移,小粒徑作用更突出:
納米塑料暴露顯著提高粘質(zhì)沙雷氏菌的接合轉(zhuǎn)移頻率(T2 組 22.98%、T1 組 8.13%、CK 組 7.35%)和游離質(zhì)粒轉(zhuǎn)化能力(T2 組轉(zhuǎn)化頻率是 CK 組的 6 倍,T1 組是 CK 組的 2 倍),且轉(zhuǎn)移的質(zhì)粒攜帶多種抗性基因和外排泵基因。
分子對接顯示,納米塑料可與細(xì)菌細(xì)胞膜蛋白(如 5NUQ,結(jié)合能 – 8.54kcal/mol)結(jié)合,像 “牽引器” 一樣促進(jìn)細(xì)菌間接觸;同時(shí),納米塑料能增強(qiáng)細(xì)菌運(yùn)動(dòng)能力(T2 組細(xì)菌擴(kuò)散圈最大),進(jìn)一步提高 ARGs 水平轉(zhuǎn)移頻率。
現(xiàn)在,百邁客生物細(xì)菌基因組產(chǎn)品帶著五大核心升級重磅來襲,從樣本起始量到分析周期,從組裝方式到數(shù)據(jù)應(yīng)用,全方位打破行業(yè)瓶頸,為你的科研加速!
??很多時(shí)候,科研中的細(xì)菌樣本來之不易 —— 可能是臨床分離的少量病原菌,也可能是環(huán)境中富集的稀缺菌株,樣本量不足往往讓后續(xù)實(shí)驗(yàn) “卡殼”。此次百邁客生物 產(chǎn)品針對性優(yōu)化建庫技術(shù):
再也不用為 “樣本少” 發(fā)愁,讓每一份寶貴樣本都能發(fā)揮最大研究價(jià)值!?
傳統(tǒng)細(xì)菌基因組組裝常需依賴二代數(shù)據(jù)校正,不僅增加了實(shí)驗(yàn)成本,還延長了分析周期,流程銜接中也容易出現(xiàn)問題。
百邁客生物此次實(shí)現(xiàn)僅三代組裝技術(shù)突破:無需搭配二代數(shù)據(jù),僅憑三代長讀長優(yōu)勢,就能完成高質(zhì)量基因組組裝。更重要的是,我們已搭建好完備的純?nèi)治隽鞒蹋瑥臄?shù)據(jù)下機(jī)到組裝結(jié)果輸出,全程標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化,無需你額外調(diào)試,拿到樣本即可啟動(dòng)分析,大幅減少流程搭建的時(shí)間成本。
科研競爭講究 “時(shí)間就是成果”,漫長的分析周期往往會錯(cuò)過最佳研究窗口。
百邁客生物通過技術(shù)優(yōu)化與流程重構(gòu),將細(xì)菌基因組項(xiàng)目的整體周期壓縮至低至 15 天—— 從樣本接收、建庫測序,到組裝分析、結(jié)果交付,全程高效推進(jìn),讓你更快拿到核心數(shù)據(jù),加速論文撰寫與項(xiàng)目結(jié)題。
“樣本做廢了”“數(shù)據(jù)沒出來”,是科研中最讓人崩潰的情況。百邁客生物深知實(shí)驗(yàn)可靠性的重要性,通過優(yōu)化樣本提取、建庫緩沖體系等關(guān)鍵環(huán)節(jié),將細(xì)菌基因組項(xiàng)目的整體成功率提升至≥95% ,顯著高于行業(yè)平均提取與實(shí)驗(yàn)成功率。
無論是復(fù)雜細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的細(xì)菌,還是低豐度樣本,我們都能最大限度保障實(shí)驗(yàn)成功,讓你的科研每一步都更穩(wěn)妥。
誰說數(shù)據(jù)分析不能又快又聰明?百邁客生物獨(dú)家提供個(gè)性化云上服務(wù),秒殺絕大多數(shù)同行!涵蓋六大功能,總有一款適合您:
百邁客生物打破這一局限,推出行業(yè)稀缺的個(gè)性化上云服務(wù),五大核心功能直擊研究痛點(diǎn),讓數(shù)據(jù)挖掘更高效、更精準(zhǔn)。
百邁客生物會將您的項(xiàng)目報(bào)告推送到您的云賬號下,在項(xiàng)目下可以直接進(jìn)行個(gè)性化分析,無需再整理復(fù)雜的文件表格進(jìn)行輸入,無生物學(xué)基礎(chǔ)亦可輕松拿捏基因組個(gè)性化分析。
1、通用數(shù)據(jù)庫注釋篩選
基于云平臺,你可根據(jù) “毒力基因”“耐藥基因”“代謝通路” 等研究關(guān)鍵詞,一鍵篩選目標(biāo)注釋結(jié)果,無需在海量數(shù)據(jù)中手動(dòng)查找;
打分參數(shù)、可靠性參數(shù)設(shè)置,均可隨性設(shè)置。
2、基因組圖譜查詢
云平臺內(nèi)置【基因組圖譜展示工具】,點(diǎn)擊即可查看基因組環(huán)形圖、基因位置分布等信息,直觀掌握基因組結(jié)構(gòu)(示意圖如下)
3、T3SS分泌系統(tǒng)預(yù)測
基于EffectiveT3精準(zhǔn)預(yù)測III型分泌蛋白,致病機(jī)制研究更深入!
4、GTDB-tk分類鑒定
輸入細(xì)菌基因組序列,即可通過該工具完成物種分類,明確菌株進(jìn)化地位
5、ANI分析
快速計(jì)算基因組間相似性,可選多參考基因組比對,并生成熱圖,物種界定更輕松!
6、SNP進(jìn)化樹構(gòu)建
物種進(jìn)化樹(?稱系統(tǒng)發(fā)育樹或?命樹)是?物學(xué)中?來描述不同物種或?物類群之間演化關(guān)系的樹狀圖。它通過分?結(jié)構(gòu)展示物種的分化過程、共同祖先及親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近。使?snippy軟件進(jìn)?core snp 分析,基于樣本間的core snp ,使?phmyl構(gòu)建進(jìn)化樹,展示?標(biāo)物種與給定的菌株之前的近緣關(guān)系。
用 snippy 篩選核心 SNP,結(jié)合 phmyl 構(gòu)建進(jìn)化樹,清晰展示目標(biāo)菌株與參考菌株的親緣關(guān)系,助力溯源與進(jìn)化分析。
從 “能做” 到 “做好”,從 “出數(shù)據(jù)” 到 “出成果”,百邁客生物細(xì)菌基因組產(chǎn)品始終以研究者需求為核心,不斷迭代升級。此次五大升級已全面落地,后續(xù)還將推出更多貼合科研場景的功能,為你的細(xì)菌研究提供更強(qiáng)大的技術(shù)支撐!
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2 打開更新結(jié)題報(bào)告選項(xiàng)卡:進(jìn)入?yún)?shù)更改設(shè)置
3 進(jìn)行參數(shù)更改設(shè)置
4 參數(shù)全部填寫完成后,點(diǎn)擊提交
5 查看報(bào)告
6 新報(bào)告結(jié)果下載:打開新的報(bào)告,點(diǎn)擊這份報(bào)告的右上角-項(xiàng)目結(jié)果下載-進(jìn)行下載結(jié)果數(shù)據(jù),就可以得到更新的這份報(bào)告的全部結(jié)果。
注: 任務(wù)不要重復(fù)多次提交,一次建議只運(yùn)行一個(gè)主流程任務(wù),多任務(wù)并行會導(dǎo)致卡頓,以至運(yùn)行失敗。一般正常任務(wù) 一天之內(nèi)能夠分析完成,如一天之后還沒運(yùn)行完成,可能就是任務(wù)失敗了,需要聯(lián)系后臺人員查看報(bào)錯(cuò)原因處理。
]]>純?nèi)?vs 混合組裝的硬核數(shù)據(jù)對比(基于實(shí)測菌株組裝結(jié)果)
注意:組裝序列條數(shù)>1的為質(zhì)粒個(gè)數(shù)
傳統(tǒng)混合組裝依賴二代數(shù)據(jù)糾錯(cuò),而百邁客優(yōu)化算法直接解析三代長讀長數(shù)據(jù),顯著縮短周期、降低成本。
菌株菌實(shí)現(xiàn)完美環(huán)狀染色體閉合。
BUSCO完整性>99% + 污染率≤0.08%,達(dá)到國際參考基因組標(biāo)準(zhǔn)。
研究熱點(diǎn):元素循環(huán) | 污染修復(fù) | 植物-微生物互作
研究樣本類型:
① 土壤:農(nóng)田、森林、沙漠、凍土、鹽堿地、草地、濕地等不同生態(tài)類型的土壤;
② 泥:污泥、混凝土、礦地、泥炭地、生活垃圾;
③ 沉積物:湖泊、近海、海洋底泥。
核心方向:
① 元素循環(huán):微生物驅(qū)動(dòng)的碳氮循環(huán)(如甲烷氧化菌、硝化菌);
② 污染修復(fù):污染物(重金屬、農(nóng)藥)的微生物降解機(jī)制;
③ 植物微生物互作:植物根際促生菌(PGPR菌群)與土壤健康研究。
?創(chuàng)新前處理方案:
① 針對含水量較多的樣本(如濕地等,如圖1.1)采用高速離心脫水技術(shù):為了富集微生物,取完樣本后高速離心去除濕地中的水分,避免導(dǎo)致后續(xù)提取得到的核酸量偏少不足下游PCR反應(yīng);
② 針對于礦地等礦物元素以及重金屬含量豐富的土壤(見圖1.2)采用PBS富集+重金屬去除:①介于重金屬脅迫下微生物豐度可能降低,為了獲取更多微生物,前處理會用無菌PBS buffer對微生物進(jìn)行富集處理。②重金屬(如As、Cd、Pb)可能結(jié)合核酸或抑制酶活性,為了避免重金屬殘留對后續(xù)PCR反應(yīng)的抑制作用,前處理初步除重金屬等雜質(zhì);
③ 針對于微生物含量較低的砂土(見圖1.3)采用低微生物量增強(qiáng)富集方案:砂土中的微生物含量相對較低,正常的樣本取樣量提取后的核酸濃度極低,很難滿足下游反應(yīng)。為了解決這一問題,前處理會用無菌PBS buffer對更多組織樣本進(jìn)行組織涮洗,富集微生物;
④ 針對于腐殖質(zhì)含量較高的土壤(如黑土等,見圖1.4)采用腐殖質(zhì)深度清除工藝:為了減少腐殖質(zhì)對提取后核酸的下游反應(yīng)的抑制作用,在提取過程中增加除雜劑以達(dá)到充分去除腐殖質(zhì)的效果。
研究熱點(diǎn):元素循環(huán) | 重金屬污染修復(fù)
研究樣本類型:
① 自然水體:海洋/河流/湖泊/地下水/冰川水;
② 人工水體:污水處理廠/養(yǎng)殖池
核心方向:
① 元素循環(huán):農(nóng)田徑流對水質(zhì)的影響。
② 污染修復(fù):重金屬的微生物降解機(jī)制;
?創(chuàng)新前處理方案:
① 濾膜樣本:碎片化裂解+二次過濾建議(圖2.1):將濾膜(使用0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾大體積水樣)剪碎后放入裂解緩沖液。(若濾膜很干凈,說明微生物含量很低,建議繼續(xù)過濾更大體積水樣至濾膜表面有明顯痕跡。)
② 液態(tài)樣本:離心富集法(圖2.2、2.3):若樣本較澄清,為了富集更多微生物,取2ml-50mL液體樣本離心富集收集微生物沉淀。若樣本較渾濁,則正常取樣。
研究熱點(diǎn):中藥治療?|?代謝疾病?|?腸X軸?|?免疫疾病
研究樣本類型:
①家畜(牛、豬)腸道微生物、糞便堆肥;
②魚類、昆蟲、哺乳動(dòng)物腸道、糞便微生物。
核心方向:
① 中藥治療:中草藥與腸道微生物組成密切相關(guān)。
② 代謝疾病:微生物對宿主代謝(肥胖、糖尿病等)的影響。
③ 腸X軸:八大腸X軸,如腸-腦軸(Gut-Brain Axis)與神經(jīng)退行性疾病(如阿爾茨海默?。┑年P(guān)聯(lián)。
④ 免疫疾?。耗c道微生物與宿主免疫系統(tǒng)的交互(如調(diào)節(jié)T細(xì)胞分化)。
?創(chuàng)新前處理方案:
① 腸道樣本(圖3.1、3.2):采用粘膜剝離+多級除雜技術(shù):為了初步去除宿主以及大分子雜質(zhì),前期會將腸道的內(nèi)容物從腸道黏膜中釋放,充分獲取微生物并進(jìn)行初步除雜。
② 硬質(zhì)糞便:強(qiáng)化研磨破壁工藝:相較于圖3.4的小鼠糞便來說,圖3.3的小鼠糞便使用普通的研磨珠無法打碎從而導(dǎo)致提取后的核酸含量較低,為了使微生物充分釋放,提取時(shí)會進(jìn)行充分研磨獲取糞便微生物。
]]>經(jīng)驗(yàn)分享:
百邁客生物近年來承接的樣本包含且不局限于上文所述的各種組織類型。利用目前現(xiàn)有成熟的提取技術(shù),針對不同組織類型采用最精準(zhǔn)的提取方法,使得微生物樣本合格率可以達(dá)到97%以上,其中擴(kuò)增子二代樣本合格率可以高達(dá)99%以上。
近日,中國科學(xué)家發(fā)現(xiàn)一株神奇菌株Sinomonas gamaensis NEAU-HV1,它通過重塑植物關(guān)鍵蛋白互作網(wǎng)絡(luò),打破生長抑制枷鎖,讓作物產(chǎn)量飆升!成果登上國際頂刊!
中文標(biāo)題:《Sinnomaras gamaensis NEAU-HV1通過重塑IAA14-ARF7/19互作促進(jìn)植物生長》
英文標(biāo)題:Sinomonas gamaensis NEAU-HV1 remodels the IAA14-ARF7/19 interaction to promote plant growth
發(fā)表期刊:New Phytologist
影響因子:10.2
合作單位:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
百邁客生物為該研究提供了高通量絕對定量測序及分析等相關(guān)工作。
植物生長素信號通路中,IAA14蛋白是關(guān)鍵的“剎車控制器”——它與生長素響應(yīng)因子ARF7/19結(jié)合時(shí),會抑制下游促生長基因表達(dá)。傳統(tǒng)促生菌多通過分泌激素“強(qiáng)推”生長,但NEAU-HV1菌株另辟蹊徑:它直接改寫IAA14與ARF7/19的互作模式,讓“剎車”松動(dòng),植物自主釋放生長潛能!
核心發(fā)現(xiàn):NEAU-HV1對生長素信號的影響可能通過重塑SOLITARY-ROOT(SLR)/IAA14與ARF7/19的互作實(shí)現(xiàn),且該過程不依賴生長素受體TIR1/AFB2,為植物-微生物互作機(jī)制提供了新見解。
① 菌株與培養(yǎng)條件
NEAU-HV1 分離自棉田土壤,使用TSB培養(yǎng)基(28°C,250 rpm)培養(yǎng)。
對照菌株:解淀粉芽孢桿菌FZB42和伯克霍爾德菌CC-A174。
② 植物材料與處理
擬南芥(Col-0野生型及突變體)、生菜、小麥、玉米、花生等。
細(xì)菌懸液(10?–10? CFU/ml)處理種子或幼苗,評估生長表型。
③ 促生長特性分析
溶磷能力(NBRIP培養(yǎng)基)、ACC脫氨酶活性(DF培養(yǎng)基)、IAA產(chǎn)量(HPLC檢測)。
④ 根際定殖能力
高通量測序結(jié)合內(nèi)標(biāo)法定量NEAU-HV1在根際和根內(nèi)的動(dòng)態(tài)豐度。
⑤ 分子機(jī)制解析
轉(zhuǎn)錄組分析、酵母雙雜交(Y2H)、雙分子熒光互補(bǔ)(BiFC)、微量熱泳動(dòng)(MST)等技術(shù)驗(yàn)證IAA14-ARF7/19互作。
① NEAU-HV1顯著促進(jìn)作物生長
生菜、小麥、玉米、花生的生物量(鮮重、干重)和根系長度顯著增加。
田間試驗(yàn)中,NEAU-HV1處理使花生株高增加56.4%,蛋白質(zhì)含量提升16.5%。
② 多效性促生長特性
溶磷指數(shù)(PSI=4.1)、IAA產(chǎn)量(22.14 μg/ml)、ACC脫氨酶活性均優(yōu)于對照菌株。
③ 根際與內(nèi)生定殖能力
接種20天后,根際和根內(nèi)菌量分別達(dá)4.2×103和7.6×103 copies/g鮮重。
④ 代謝物通過生長素信號誘導(dǎo)側(cè)根形成
NEAU-HV1代謝物促進(jìn)側(cè)根原基(LRP)從階段I向VII的發(fā)育,且不抑制主根伸長。
該過程依賴 IAA14-ARF7/19 信號模塊,但與TIR1/AFB2受體無關(guān)。
傳統(tǒng)研究多停留在微生物的“有無”層面,而本研究通過高通量微生物絕對定量技術(shù),將含量多少轉(zhuǎn)化為精確的拷貝數(shù)數(shù)據(jù),如同為細(xì)胞安裝“納米級傳感器”。本研究首次揭示 S. gamaensis NEAU-HV1 通過分泌代謝物重塑IAA14與ARF7/19的互作,獨(dú)立于經(jīng)典生長素受體激活側(cè)根發(fā)育。其多效性促生長特性(溶磷、產(chǎn)IAA、根際定殖)及對脂肪酸組成的調(diào)控(增加短鏈飽和脂肪酸)展現(xiàn)了廣闊的農(nóng)業(yè)應(yīng)用潛力。未來需進(jìn)一步解析其活性代謝物的化學(xué)結(jié)構(gòu),以深化對植物-微生物互作機(jī)制的理解。
從分子開關(guān)的精準(zhǔn)調(diào)控到絕對定量技術(shù)的革新,這項(xiàng)研究不僅解鎖了植物生長的“隱藏技能”,更展現(xiàn)了合成生物學(xué)在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的無限可能。未來,我們或許只需一株工程菌,就能讓萬畝良田“自主升級”!
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